OZ Biosciences 提供模擬完全加工成熟mRNA定制。
憑借超過 15 年的核酸遞送專業(yè)知識(shí)，OZ Biosciences 有信心為您提供一流的服務(wù)來生產(chǎn)高質(zhì)量的 mRNA。我們能夠合成微克到數(shù)克規(guī)模的定制 mRNA，從幾百個(gè)到幾千個(gè)堿基，進(jìn)行各種修飾，包括帶帽的 5′ 末端修飾、內(nèi)部修飾，例如 5-甲氧基尿苷（其他修飾的核苷酸也可用） ) 和 3′ 修飾，例如 poly-A 尾。可以使用 Cy5、Cy3 或其他選項(xiàng)進(jìn)行熒光標(biāo)記。我們還提供未修飾的 mRNA。
我們的服務(wù)包括：
– 基因合成、克隆和 DNA 模板生產(chǎn)
-體外轉(zhuǎn)錄合成mRNA
– 純化和質(zhì)量控制
3種mRNA：
– Reporter gene mRNAs: 研究轉(zhuǎn)染效率的理想對(duì)照
– Genome editing mRNA: 用于 CRISPR 基因組編輯的 Cas9 mRNA
– Vaccine mRNAs: 作為免疫或疫苗研究的理想對(duì)照
mRNA 轉(zhuǎn)染具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
* 不需要核攝取 – 蛋白質(zhì)直接在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)
* 比DNA 轉(zhuǎn)染更快的蛋白質(zhì)表達(dá)
* 無基因組整合
* 蛋白質(zhì)表達(dá)與mRNA數(shù)量直接相關(guān)
* 非常適合轉(zhuǎn)染慢細(xì)胞或非分裂細(xì)胞
* 以完全不依賴啟動(dòng)子的方式表達(dá)蛋白質(zhì)
* 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：基于 mRNA 的蛋白質(zhì)表達(dá)持續(xù)有限的時(shí)間
Reporter gene mRNAs(5moU): 研究轉(zhuǎn)染效率的理想對(duì)照
報(bào)告基因常用于細(xì)胞生物學(xué)研究。 OZ Biosciences 提供的報(bào)告基因 mRNA 可用作對(duì)照，以使用各種檢測(cè)方法研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染和表達(dá)。 它們模擬完全加工的成熟 mRNA。
這些 mRNA 是通過體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的，并通過修飾的核苷酸加帽 (Cap1) 在 5′ 端穩(wěn)定。它們?cè)?3′ 末端包含一個(gè) poly(A) 尾，并且還經(jīng)過優(yōu)化以提高穩(wěn)定性和性能。它們用 5-甲氧基尿苷（5moU 取代 U）修飾以減少先天免疫反應(yīng)。
技術(shù)要點(diǎn)：
*GFP mRNA 旨在產(chǎn)生高表達(dá)水平的綠色熒光蛋白。 它是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中常用的直接檢測(cè)報(bào)告基因，可產(chǎn)生亮綠色熒光，發(fā)射峰位于 509 nm。
*F-Luc mRNA旨在產(chǎn)生高表達(dá)水平的 FireFly 熒光素酶。它通常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)以測(cè)量基因表達(dá)和細(xì)胞活力。它在底物熒光素存在下發(fā)出生物發(fā)光。
*Tomato mRNA旨在產(chǎn)生高表達(dá)水平的橙色熒光蛋白。檢測(cè)可以通過熒光或共聚焦顯微鏡來完成。生產(chǎn)的番茄的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 551-557 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 579-583 nm。番茄表達(dá)水平也可以通過熒光激活細(xì)胞分選儀分析 (FACS) 進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
*mCherry mRNA 編碼熒光蛋白 mCherry，該蛋白源自 DsRed，一種在Discosoma sp 中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì) 。mCherry 是一種單體熒光團(tuán)，在 587 nm 處具有峰值吸收，在 610 nm 處發(fā)射。它具有光穩(wěn)定性和耐光漂白性。
*β-半乳糖苷酶 ( β-gal) mRNA，編碼細(xì)菌 LacZ基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。 β-gal催化β-半乳糖苷轉(zhuǎn)化為單糖。它是用于評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的常用標(biāo)記基因。
常用型號(hào)有：mRNA10-20、mRNA10-100、mRNA10-1000、mRNA11-20、mRNA11-100等，儲(chǔ)存：-80°C
應(yīng)用：使用多種檢測(cè)方法在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)，包括熒光顯微鏡、定量熒光測(cè)定法和生物發(fā)光成像，以及熒光激活細(xì)胞分選 (FACS)。
推薦用于：轉(zhuǎn)染效率的陽性對(duì)照
Genome editing mRNA: 用于 CRISPR 基因組編輯的 Cas9 mRNA
質(zhì)粒和病毒載體傳統(tǒng)上用于 CRISPR 基因組編輯以表達(dá)所需的蛋白質(zhì)。然而，使用 DNA 代替 mRNA 存在風(fēng)險(xiǎn)：雙鏈 DNA 斷裂催化 DNA 在切割位點(diǎn)插入。在一些相當(dāng)大的頻率下，蛋白質(zhì)表達(dá)載體可以整合，這可以導(dǎo)致核酸酶或先前沉默的序列的連續(xù)表達(dá)。
現(xiàn)在 mRNA 正在成為基因組編輯的強(qiáng)大工具。由于沒有插入突變的風(fēng)險(xiǎn)，mRNA 用于瞬時(shí)表達(dá)所需的蛋白質(zhì)。野生型 Cas9 mRNA 是一種穩(wěn)定的非免疫原性信使 RNA (mRNA)，旨在產(chǎn)生高表達(dá)水平的野生型 Cas9 蛋白。它在由 RNA 指導(dǎo)序列描繪的目標(biāo)位點(diǎn)處產(chǎn)生雙鏈斷裂。
該 mRNA 是通過體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的，通過修飾的核苷酸加帽在 5′ 端穩(wěn)定，并在 3′ 端包含聚 (A) 尾。mRNACas9 經(jīng)過優(yōu)化，可提高穩(wěn)定性和性能，并降低細(xì)胞先天免疫反應(yīng)。
常用型號(hào)有：mRNA31-20、mRNA31-100、mRNA32-20、mRNA32-100、mRNA32-1000、mRNA33-20、mRNA33-100、mRNA30-1000、mRNA 31-1000等，儲(chǔ)存：-80°C
應(yīng)用：對(duì)于 Cas9 mRNA：用于誘導(dǎo) DNA 中的定點(diǎn)雙鏈斷裂。這些斷裂可分別通過非同源末端連接和同源重組導(dǎo)致基因失活或引入異源基因，為基因組編輯提供有效工具。
CRE mRNA類似于完全成熟的 mRNA，具有 5’cap1 結(jié)構(gòu)和 3’polyA 尾，因此可以被核糖體翻譯。mRNA32 編碼 CRE 重組酶，該酶催化 loxP 位點(diǎn)之間的 DNA 重組。重組產(chǎn)物取決于 loxP 位點(diǎn)的位置和相對(duì)方向：
Vaccine mRNAs: 作為免疫或疫苗研究的理想對(duì)照
與傳統(tǒng)的 DNA 和基于病毒的方法相比，mRNA 疫苗具有多種優(yōu)勢(shì)：
表達(dá)所需抗原并作為佐劑。
防止基因組整合的風(fēng)險(xiǎn)，不需要滅活病毒或病原體。
不需要核攝取 – 蛋白質(zhì)直接在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)
非常適合轉(zhuǎn)染慢細(xì)胞或非分裂細(xì)胞，如抗原呈遞細(xì)胞 (DC)
比 DNA 轉(zhuǎn)染更快的蛋白質(zhì)表達(dá)
以完全不依賴啟動(dòng)子的方式表達(dá)蛋白質(zhì)
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：基于 mRNA 的蛋白質(zhì)表達(dá)持續(xù)有限的時(shí)間
常用型號(hào)有：mRNA41-20、mRNA41-100、mRNA41-1000、mRNA42-20、mRNA42-100、mRNA42-1000等，儲(chǔ)存：-80°C
應(yīng)用：
OVA mRNA 編碼 OVA 蛋白，OVA 蛋白是免疫和生化研究常用的抗原，也是已建立的氣道高反應(yīng)性模型過敏原。
我們提供修飾的 OVA mRNA (5moU)和未修飾的 OVA mRNA ，它們通過體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，并通過修飾的核苷酸加帽 (Cap1) 在 5′ 端穩(wěn)定。它們?cè)?3′ 末端包含一個(gè) poly(A) 尾。
– 外源未修飾的 mRNA激活先天免疫系統(tǒng)和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，以影響誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。
– 修飾的 mRNA (5moU-ref# mRNA41) 用 5-甲氧基尿苷修飾。這種核苷修飾增強(qiáng)了 mRNA 的穩(wěn)定性和翻譯能力，同時(shí)降低了其體內(nèi)免疫原性。
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